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NEB kits clonagem

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Descrição do produto

A NEB disponibiliza uma ampla variedade de kits completos e MasterMix para clonagem em biologia molecular. Veja abaixo os produtos disponíveis.

■  NEB PCR Cloning Kit 
■  Gibson Assembly®
■  NEBuilder® HiFi DNA Assembly
■  Golden Gate Assembly
■  BioBrick® Assembly 

Características e vantagens:

  • Clonagem rápida e fácil de todos os tipos de produtos de PCR (blunt ends  ou TA ends);
  • Protocolo de clonagem rápido, com etapa de ligação de apenas 5 minutos;
  • Economia de tempo eliminando a necessidade dos passos de purificação;
  • Vários sítios de restrição disponíveis para facilitar a clonagem;
  • Virtualmente 100% das colônias são positivas: sem a necessidade de seleção por cor (azul/branco);
  • Inclui primers para confirmação da clonagem por PCR ou sequenciamento;
  • Contém inserto controle (1kb), vetor de clonagem linearizado e coli competente;
  • Maior prazo de validade (~12 meses).

 

Figura 1. Clonagem de produtos de PCR sem background.  Produto de PCR 500bp foi incubado com o vetor linearizado na proporção 3:1 e de acordo com o protocolo recomendado. 2μl da reação foram transformados na NEB 10-beta Competente E. coli fornecida juntamente com o kit e plaqueadas. Esquerda: placa controle contendo vetor sem inserto. Direita: placa contendo inserto.

 

Veja como o protocolo do NEB PCR Cloning kit é rápido e simples:

Para acessar uma brochura sobre o produto NEB PCR Cloning Kit, clique aqui.

 

Gibson Assembly® une eficientemente múltiplos fragmentos de DNA com extremidades complementares através de uma única reação.

Vantagens:

  • Montagem e transformação em pouco menos de duas horas;
  • Sem necessidade de purificação da PCR;
  • Compatível com qualquer tipo de extremidade de fragmento;
  • Elevada eficiência de transformação para inserções de até 20Kb;
  • Facilmente adaptável para múltiplas aplicações, incluindo mutagênese sítio-dirigida;
  • Inclui células competentes (versão kit).

 

Para acessar uma brochura sobre o produto Gibson Assembly, clique aqui.

 

NEBuilder® HiFi DNA Assembly une múltiplos fragmentos de DNA com elevada eficiência e independentemente do tamanho ou compatibilidade das extremidades. A clonagem dos fragmentos em um plasmídeo, após total construção, é transformada na E.coli competente NEB5α. Diferentemente do Gibson Assembly®, o NEBuilder® HiFi DNA Assembly utiliza uma polimerase de alta fidelidade, oferecendo maior segurança e virtualmente livre de erros na montagem dos fragmentos.

Vantagens:

  • Montagem e transformação em pouco menos de duas horas;
  • Não é necessária etapa de purificação do PCR;
  • Compatível com qualquer tipo de extremidade do fragmento;
  • Utiliza uma enzima de alta fidelidade;
  • Elevada eficiência de transformação de inúmeros fragmentos longos (até 20Kb);
  • Facilmente adaptável para múltiplas aplicações, incluindo mutagênese sítio-dirigida;
  • Inclui células competentes (versão kit).

 

Para acessar uma brochura completa sobre o produto NEBuilder® HiFi DNA Assembly, clique aqui.

 

Golden Gate Assembly é capaz de eficientemente unir múltiplos fragmentos de DNA ordenadamente através da utilização de uma enzima de restrição tipo IIS e T4 DNA ligase. Os insertos e vetores de clonagem são desenhados de uma maneira que o sítio de restrição tipo IIS são localizados distalmente em relação ao sítio de clivagem, permitindo a remoção do sítio após a montagem. O resultado é um plasmídeo com o fragmento de interesse inserido de forma ordenada e sem introdução de sequências extras.

Vantagens:

  • Nenhuma extremidade overhang do inserto é adicionada ao plasmídeo, evitando assim introdução de sequências extras;
  • As extremidade específicas dos fragmentos permitem montagem ordenada de múltiplas sequências simultaneamente;
  • O sítio de restrição é eliminado após a montagem, permitindo a restrição e ligação em uma única reação;
  • Utiliza enzimas de restrição tipo IIS que criam uma extremidade overhang de 4 bases (BsaI/BsaI-HF®, BbsI, BsmBI e Esp3I).


Para acessar uma brochura sobre o produto Golden Gate Assembly, clique aqui.

 

BioBrick® Assembly é parte da tecnologia BioBrick® para montagem de novos sistemas biológicos através da biologia sintética. Nesta metodologia, fragmentos de DNA clonados em plasmídeos de registro contendo os mesmos sítios de restrição são ligados em novos formatos para criação de novas sequências dos genes de interesse. Para informações técnicas sobre a metodologia BioCrick® clique aqui.

Para acessar uma brochura sobre o produto Biobrick Assembly, clique aqui.

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