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CRISPR/Cas9

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CRISPR/Cas9

Edição de genomas através do sistema CRISPR/Cas9

A descoberta recente do sistema CRISPR (Clustered Regularly Interspaced Short Palindromic Repeats) em procariotos, originalmente descoberto na bactéria Streptococcus pyogenes, tem revolucionado o campo de biologia molecular e engenharia genética. O sistema CRISPR funciona como um mecanismo natural de defesa contra vírus e DNA exógeno em bactérias e foi remodelado por pesquisadores para edição gênica altamente eficiente em sítios direcionados no genoma desejado.O sistema utiliza uma nuclease associada ao CRISPR (Cas9) que forma um complexo com pequenos RNAs guias (gRNAs) para clivagem do DNA em uma sequência específica logo após o um motivo chamado PAM (protospacer adaptor motif), em qualquer localização genômica homóloga ao gRNA. O sistema CRISPR/Cas9 é formado por RNAs guias independentes conhecidos como crRNA e tracrRNA. Na tecnologia atualmente utilizada na pesquisa biomédica, esses dois RNAs foram combinados em um único RNA que permite um corte sítio-específico no genoma de mamífero através do design de um gRNA específico para o gene alvo.

Veja abaixo um esquema das sequências envolvidas na clivagem do DNA pela nuclease Cas9:

CRISPR/Cas9, Uniscience Produtos para Laboratório
Através da nuclease Cas9 nativa ou com atividade de nickase, é possível clivar o DNA alvo na sequência desejada, tanto clivagem da dupla-fita quanto apenas uma das fitas (nick) do alvo.

Através de diferentes mecanismos de reparo do DNA celular a sequência alvo será editada e reparada por via recombinação homóloga (HR, homologous recombination) ou não-homóloga (NHEJ, nonhomologous end joining).

Por exemplo, no caso de uma inserção knock-in no genoma hospedeiro, um vetor de recombinação homóloga que contenha uma sequência para susbtituição no genoma deve ser utilizado.

A Cas9 clivará a fita de DNA no alvo escolhido e o reparo celular via recombinação homóloga permitirá a incorporação da sequência do vetor de recombinação homóloga na posição desejada do genoma.

Veja abaixo algumas das possibilidades que o sistema CRISPR/Cas9 oferece:

CRISPR/Cas9, Uniscience Produtos para Laboratório
A Uniscience oferece diferentes reagentes e plasmídeos para utilização desta metodologia em seu laboratório, além dos serviços customizados para planejamento de experimentos, clonagem de vetores e células recombinantes customizadas.
CRISPR/Cas9, Uniscience Produtos para Laboratório, NEB
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CRISPR/Cas9, Uniscience Produtos para Laboratório, Oxford Genetics

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