Descrição
CRISPR 02 SBI
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A descoberta recente do complexo CRISPR/Cas9 forneceu aos pesquisadores uma valiosa ferramenta para direcionar e modificar qualquer sequência genômica com alta especificidade e eficácia. O sistema consiste em uma nuclease guiada por RNAs (Cas9) e um RNA guia (gRNA) complementar à sequência alvo. Esse sistema permite a clivagem da sequência alvo no genoma e permite realização de inserções, deleções ou mutações na região selecionada. |
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PrecisionX™ Cas9 SmartNuclease permite utilização do sistema CRISPR/Cas9 de maneira extremamente prática e eficiente |
A SBI oferece:
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Worflow básico de um protocolo de edição gênica utilizando Cas9 – DESIGN: planejamento dos gRNAs para o gene alvo e plasmídeo de expressão da Cas9 a ser utilizado para knock-in, knock-out ou tagging. O uso de vetor de recombinação homóloga é altamente recomendado pois aumenta consideravelmente a eficiência da edição gênica. – CLONAGEM: ligação do gRNA ao vetor contendo Cas9 (Cas9 All-in-one vector) ou vetor específico para gRNAs. Realização da clonagem das sequências homólogas ao gene alvo no vetor de recombinação homóloga e, no caso de knock-in, a sequência de DNA para substituição. – CO-TRANSFECÇÃO ou CO-INJEÇÃO: introdução da Cas9, gRNAs e sequência de recombinação homóloga nas células alvo utilizando reagentes para transfecção de plasmídeos, transdução lenti/adenoviral ou co-injeção de mRNAs. – SELEÇÃO: seleção das células mutadas de acordo com o método desejado (seleção por antibióticos, fluorescência ou outros). – VALIDAÇÃO: realização de PCR e/ou sequenciamento para confirmação da edição gênica no genoma celular (em um ou ambos alelos). |
Guias de aplicações usando CRISPR/Cas9 Especialistas em engenharia genômica da SBI desenvolveram protocolos detalhados para novos usuários do sistema CRISPR/Cas9, descrevendo detalhes do design do gRNA e HR Donor Vector para as seguintes aplicações: |
Serviços customizados de clonagem e geração de linhagens celulares recombinantes A SBI também oferece serviços customizados para design e clonagem de gRNA e HR donor vector para qualquer projeto de engenharia genômica. Além disso, está disponível o serviço de geração de linhagens celulares recombinantes para knock-in, knock-out e mutação em diversas linhagens celulares comercialmente disponíveis. |
Sistema altamente eficiente já validado por diversos pesquisadores A SBI foi a primeira empresa comercial a oferecer as ferramentas CRISPR/Cas9 para pesquisa, iniciando em abril de 2013. Atualmente diversos pesquisadores já produziram excelentes resultados utilizando os reagentes da SBI em seu laboratório, tanto em aplicações in vitro quanto in vivo, com citações dos produtos nas publicações. Como exemplo, uma taxa de eficiência de mutação de até 75% foi descrita recentemente na NIH utilizando o sistema Cas9 SmartNuclease da SBI para edição do genoma em zigotos de camundongo, com 90% destas sendo mutações homozigotas. Consulte o site da SBI para referências bibliográficas. Verifique abaixo os produtos disponíveis ou consulte o site de nosso fornecedor clicando aqui. |