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Uniscience 20-03-2017

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Células competentes

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Células competentes bacterianas para clonagem

As cepas de E.coli competentes fornecidas pela NEB garantem transformações bem-sucedidas. Escolha o produto ideal entre as diversas apresentações e variedades com maior performance, conveniência e eficiência de clonagem. Além disso, todas as células competentes da NEB são livres de produtos derivados de animais.

Vantagens:

✔ Alta eficiência de transformação;
✔ Compatível com os kits de clonagem NEBuilder® HiFi DNA Assembly e Gibson Assembly®, e também com reações de ligação;
✔ Cepas disponíveis para clonagem de genes tóxicos;
✔ Todas as cepas são livres de produtos animais e são resistentes aos fagos T1;
✔ Meio de crescimento e plasmídeo controle inclusos;
✔ Variedade de formatos convenientes, incluindo tubos de uso único ou embalagens personalizadas e em grande escala;
✔ Não há cobranças extras de gelo seco.

 

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Células competentes bacterianas para expressão de proteínas

A NEB oferece uma ampla variedade de células competentes para expressão de proteínas, todas resistentes ao fago T1 e para transformação de alta eficiência.

Em sistemas de expressão de proteínas em E.coli, o sistema com promotor T7 é o mais popularmente utilizado. Neste sistema, o gene de interesse é clonado próximo ao promotor T7 e o plasmídeo introduzido em um organismo hospedeiro. As células hospedeiras carregam no seu cromossomo uma cópia do gene da RNA polimerase T7, o qual é controlado pelo promotor Lac. Após um indutor ser adicionado à cultura, a RNA polimerase T7 é expressa e induz juntamente a expressão do gene de interesse.

As cepas de expressão estão disponíveis com os controladores lacIq e/ou lysY. O gene lysY expressa uma variante de lisossomo T7 que naturalmente inibe a RNA polimerase T7, permitindo controle da expressão basal do gene alvo. O gene lysY está presente em uma única cópia no plasmídeo mini-F e não requer seleção com antibióticos para propagação.

 

Verifique abaixo as características das cepas para expressão de proteínas:

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Cepas derivadas de E.coli K12

A NEB disponibiliza diversas cepas de bactérias derivadas de E.coli K12. Esses produtos são disponibilizados gratuitamente na compra de outros produtos da marca.

Consulte o site de nosso fornecedor para maiores informações.

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Célula competentes de leveduras

A NEB disponibiliza kits e vetores para expressão de proteínas em levedura Kluyveromyces lactis. As proteínas podem ser produzidas intracelularmente ou secretadas quando expressas através de um plasmídeo específico para secreção dos produtos (pKLAC2). Para secreção da proteína expressa, o gene de interesse é clonado abaixo do fator de secreção α-mating  (α-MF) de K. lactis, que é processado no complexo de Golgi e resulta na secreção da proteína desejada.

O sistema de expressão em K. lactis oferece diversas vantagens em relação ao sistema de expressão em procariotos. Primeiramente K. lactis tem sido usada para produção de proteínas em escala industrial para indústria de alimentos por mais de uma década pois atinge alta densidade celular rapidamente e produz proteínas recombinantes em abundância. Além disso, a expressão em levedura é obtida através de um forte promotor (LAC4) que foi modificado de maneira a não ser expresso em bactérias. Dessa maneira, é possível a clonagem de genes tóxicos para bactérias no pKLAC2 previamente à expressão na levedura. A alta qualidade das leveduras contidas no kit permitem rápida transformação das células e facilita o uso de bibliotecas de cDNA para expressão de diferentes proteínas de maneira eficiente. A seleção dos transformantes utiliza um método livre de antibióticos, no qual acetamida (amdS) é expressa através do vetor pKLAC2, promovendo a formação de células contendo diferentes integrações de pKLAC2 e maiores quantidades de proteína expressas. Finalmente, o sistema de expressão em leveduras permite empacotamento e glicosilação de proteínas ausentes nos sistemas procariotos, oferecendo uma importante alternativa para expressão em bactérias.

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No núcleo celular, o vetor permite a expressão de uma sequência contendo o domínio (azul) com o gene de interesse (preto). Um peptídeo sinal redireciona a entrada da proteína expressa no retículo endoplasmático (ER) onde é processada pela peptidase (SP) para remoção da sequência sinal. A proteína recombinante segue para o complexo de Golgi para um processamento adicional e é finalmente secretada.

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Utilize a ferramenta abaixo e selecione as opções ideais para seu experimento de clonagem:

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Para acessar uma brochura completa sobre os produtos NEB Competent Cells, clique aqui.

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